Q1：產品是否為GMP級別？
A：依科賽的無血清生產車間是按照GMP標準建設的車間，依科賽SFM產品的質量體系是按照醫療器械的GMP規范建設。
Q2：凍存液我收到后直接放-20℃了，還能正常使用嗎？
A：凍存液凍存后并不會影響凍存液的性能，但是由于凍存時體積增加，可能會導致密封性受到影響，可在4攝氏度融化后用0.22um的濾膜過濾后使用。
Q3：是否接受定制？
A：可以根據您的要求提供定制服務，但需要先和我們的研發人員進行詳細溝通，您可以先將您的具體需求告訴我，以便研制中心進行評估。

Q1：使用本產品是否需要加入胰酶終止液？
A：本產品為溫和消化酶，無需胰酶抑制劑終止。

Q1： 產品儲存注意事項？
A ：基礎培養基2-8℃儲存，避光。添加組分-20℃儲存，避免反復凍融。
Q2：產品是否需要額外添加物質？
A：本產品為kit包裝，將基礎培養基+添加組分進行配制即可得到完全培養基，可直接進行細胞培養，無需添加額外物質；本產品不含有抗生素成分，如有需要可自行添加。
Q3：消化MSC出現細胞難消化、細胞損傷等問題如何處理？
A：推薦配套使用依科賽溫和消化酶RF01（貨號：RF000-N031），消化能力提高，細胞損傷小，存活率高；

Q1：培養基中是否含有L-谷氨酰胺？使用時，是否需要添加？
A：CHO無血清基礎培養基CE01、CHO補料培養基CA01α和CHO補料培養基CA01β均不含有L-谷氨酰胺。CHO-K1/gs-宿主細胞，CHO-DG44/dhfr-宿主細胞極其克隆株使用上述產品時，需要額外添加L-谷氨酰胺，終濃度建議4-8mM，其他細胞株均不需要額外添加L-谷氨酰胺。
Q2：培養基中是否含胰島素、生長因子、蛋白水解物或者多肽？
A：CHO無血清基礎培養基CE01、CHO補料培養基CA01α和CHO補料培養基CA01β均不含有胰島素、生長因子、植物/動物蛋白水解以及多肽等，是不含有任何蛋白質/多肽的、無動物源性、化學成分完全明確的培養基。
Q3：培養基中是否含有抗結團劑？
A：CHO無血清基礎培養基CE01含有抗結團劑；CHO補料培養基CA01α和CHO補料培養基CA01β不含。

1. 是否需要添加谷氨酰胺？
需要額外添加終濃度為 6mM 的谷氨酰胺。由于谷氨酰胺易降解，可每次使用培養基時加入谷氨酰胺，或者分裝部分培養基添加谷氨酰胺后一周內使用。
2. 不同體系培養基適應和馴化？
1)需要在培養過程中額外添加終濃度為6 mM的谷氨酰胺；加入谷氨酰胺（Gln）后需一周內使用；
2)不可反復放置于37℃預熱。如需37℃預熱，可于每次使用前分出所需體積，放于37℃預熱，剩余體積及時放回2-8℃冰箱保存；
3)如果細胞原來在其他品牌培養基里培養，可直接用本培養基產品傳代培養，傳代 3 次（9-10 天）后細胞可適應本培養基產品，活率、細胞密度穩定，可進行后續實驗。
4)如果原懸浮293細胞是用其他品牌培養基培養后凍存的，請用凍存時使用的細胞培養基來復蘇細胞，傳一代后換成本培養基產品，再傳代 3 次、細胞狀態穩定，可進行后續實驗。使用本培養基產品培養后凍存的細胞，則可以使用本培養基產品復蘇
3. 如何進行轉染？
新復蘇的細胞至少需要傳代 4 次、且活率達到 90%以上再進行轉染，轉染前根據需要調整細胞密度為 2-3×106cells/mL。將質粒、轉染試劑分別加入無菌 PBS（或轉染專用稀釋液）中稀釋，室溫靜置 5 分鐘。將轉染試劑稀釋液緩慢加入到質粒稀釋液中，混勻，室溫孵育 10-20 分鐘。將質粒-轉染試劑混合物加入懸浮 293 細胞培養液中，放入培養箱中培養。轉染后無需換液，48-72 小時后可進行轉染效率檢測、收獲蛋白或病毒等操作。
本培養基產品支持 PEI、脂質體等轉染試劑。如細胞密度為 2×106cells/mL，建議添加質粒量為 1μg/mL；如細胞密度為 3×106cells/mL，建議添加質粒量為 1.5μg/mL。如使用 PEI 轉染試劑，PEI 與質粒的質量比例建議為 3:1。
4. 如何提高轉染？
支持 PEI、脂質體等轉染試劑，質粒、轉染試劑的稀釋推薦用Opti-MEM 培養基（GIBCO 品牌）或無菌 PBS?；旌虾蟮霓D染試劑和質粒加入到293培養體系中，體積占比一般不會超過10%。
5. 如何測定病毒滴度？
1）QPCR法：使用根據慢病毒DNA設計的引物，用慢病毒裂解物為底物進行QPCR分析，根據標準曲線確定慢病毒滴度。
優點：定量、精確； 缺點：非活性計數。
2）稀釋法：使用稀釋的表達熒光蛋白的慢病毒感染細胞，盡量使1個細胞只接受1個慢病毒感染，72小時后根據熒光細胞數量計算慢病毒滴度。
優點：計算慢病毒活性；缺點：只能用于表達熒光蛋白的慢病毒。
3）流式分析檢測：使用表達熒光蛋白的慢病毒感染細胞，使用流式細胞儀分析熒光細胞比例。
優點：快捷方便；缺點：無法定量。

1. 凍存的PBMC細胞可以用嗎？
凍存的PBMC細胞可以使用，但是培養效果明顯弱于新鮮PBMC。對于凍存的PBMC，建議激活前一天進行靜息，即將細胞加入到含有NK培養基、不含包被因子的培養瓶中，放入培養箱過夜再進行激活。
2. 不加血漿效果如何？
擴增效果下降，對于初始NK較低的可能效果更差。
3. 人AB血清能否代替血漿？
可以。
4. 可以支持的細胞培養密度？
培養瓶培養建議4-5 E6/ml ； 袋子建議最高3-4 E6/ml(密度高影響生長，不同培養袋可能表現不同）。
5. 通用型NK客戶無法使用血漿怎么辦？
可選擇NK比例較大的donor。
6. 高分選NK的客戶能否使用？
完全可以，應提高血漿比例至5%，接種密度可以適當降低，接種密度范圍：0.5-2x10^6 cells/mL。
7. iPS-NK客戶能否使用？
有客戶使用基礎培養基（N012）搭配自有平臺因子成功培養iPS-NK 。
8. 培養皿/培養瓶是否需要TC-treated？
需要。
9. 能否使用滋養層細胞？
可以，滋養層細胞可替代細胞因子I和II, 對于某些滋養層細胞，可加IL-2使用，某些滋養層細胞不能單純加IL-2，仍然需要其他細胞因子，我們有擴增基礎試劑盒可以使用。
10. 激活后NK細胞擴增試劑盒P01提供的培養基不夠怎么辦？
NK細胞擴增基礎試劑盒P01（NE000-N032）含有基礎培養基、添加組分和細胞因子III，支持細胞擴增，與NK細胞擴增試劑盒P01（NE000-N022）配合使用。

1. 組分：
本產品每1L基礎培養基配發8mL添加組分，添加組分不是ICSR或者血替，化學成分明確，可放心使用，必須配成完全培養基后再使用；——可以提供成分說明及TSE/BSE的申明。
2. T細胞激活方式：
使用本產品，可根據說明書用抗體包板方式進行激活，也可購買商業抗體偶聯磁珠進行激活，本產品同樣支持磁珠激活。
3. 活率：
直接培養PBMC，D5后活率可達90%以上，從PBMC中分選出T細胞，則D3開始活率可達到90%以上，D7后活率均可達到95%以上；如果轉導CAR，轉導當天活率顯著下降，為正?，F象，繼續培養活率會持續上升。
4. 培養方式：
使用本產品，比較推薦的培養方式是D0天激活，D3、D5、D7補充培養液將細胞密度調整到0.5-1x10^6cells/ml,D7后可選擇2天或3天補一次液。
5. T細胞擴增速度：
T細胞的擴增在D3-D9速度較快，基本平穩，D9細胞擴增倍數一般可以達到200倍以上。D9后細胞擴增速度逐漸減緩，激活PBMC中的T細胞，最多可培養20天。
6. 高密度培養：
靜置培養，密度可達5-6x10^6 cells/ml，搖瓶培養或其他震蕩培養方式，密度可達10x10^6 cells/ml以上。
7. CD4/CD8比例調節：
使用本產品并且用磁珠激活，CD4比例較高，用抗體包板激活則CD8比例較高，可以通過改變激活方式、改變抗體包板濃度，調節CD4/CD8比例。
8. T細胞亞型分群：
Tn為初始T細胞，Tcm為中央記憶型T細胞，Tem為激活的Tcm，Tef為效應T細胞，分群比例隨著細胞培養的時間而變化。不同客戶對分群的要求可能不同，且不同激活方式、細胞因子的選擇以及濃度，對分群影響很大，建議客戶自行測試。
9. T細胞轉導：
根據客戶反饋測試數據，本產品陽性率可達到50%左右，但是不同客戶使用的工藝不同，可能導致陽性率有變化。CAR慢病毒轉導，可使用polybrene輔助轉導，逆轉錄病毒轉導可使用retronectin輔助轉導，也有許多新型輔助因子可提高轉導效率；采用離心轉導的方式可提高轉導效率。
10. T細胞生物反應器培養：
靜置培養后D5-D7開始在反應器中培養，在達到目標體積之前，可以2-3天補液細胞密度調整到0.5-1x10^6 cells/ml，到達目標體積后可以采取部分灌流策略。

1、文庫接頭序列錯誤。核對文庫末端序列與試劑盒提供的引物序列是否匹配。 2、稀釋度過高。減少稀釋倍數，重復實驗。 3、文庫降解。文庫應現用現稀釋，稀釋好的文庫應置于冰上備用，用完丟棄。